核酸蛋白檢測(cè)儀使用說(shuō)明和工作原理
一．簡(jiǎn)介
核酸蛋白檢測(cè)儀、紫外檢測(cè)儀是液相色譜儀的一種紫外檢測(cè)裝置，HD–21C–A、HD–21C–B型核酸蛋白檢測(cè)儀、紫外檢測(cè)儀是根據(jù)生命科學(xué)的發(fā)展對(duì)于現(xiàn)代色譜儀器的要求而改進(jìn)設(shè)計(jì)的一種新型紫外檢測(cè)儀。該儀器在**方面的主要特點(diǎn)為：
1．該儀器除了配有10mV記錄儀輸出信號(hào)外，還同時(shí)配有適合于計(jì)算機(jī)積分儀的輸出接口﹙HD–21C–B型﹚，這樣很方便于構(gòu)成色譜工作站系統(tǒng)﹙可同時(shí)進(jìn)行計(jì)算機(jī)和記錄儀信號(hào)輸出，亦可省去記錄儀﹚
2．儀器的數(shù)字顯示設(shè)計(jì)為固定光吸收A顯示和可變量程光吸收A顯示兩種可選模式，這樣可方便于規(guī)范化讀數(shù)﹙特別是可應(yīng)用于藥品生產(chǎn)的GMP工藝規(guī)范化管理﹚，同時(shí)亦可根據(jù)科研需要進(jìn)行可變量程的高靈敏度讀數(shù)，這樣可方便于對(duì)低濃度樣品檢測(cè)﹙HD–21C–B型﹚。
3．儀器采用新型進(jìn)口R212光電倍增管和改進(jìn)型電路結(jié)構(gòu)﹙HD–97–1光電倍增管為1P28型﹚，儀器全部采用數(shù)字顯示2個(gè)OD值表，用戶可直接讀出光密度A值，從而使儀器靈敏度高、峰值重復(fù)性好、漂移低、性能穩(wěn)定、質(zhì)量可靠、使用方便等優(yōu)點(diǎn)。
該儀器配上層析柱、恒流泵、自動(dòng)部分收集器、記錄儀（色譜工作站）等，即組成一套完整的液相色譜分離層析儀（系統(tǒng)）。它可應(yīng)用于現(xiàn)代生物學(xué)研究、**測(cè)定、農(nóng)業(yè)科研、化工、食品及醫(yī)療科研單位對(duì)具有紫外吸收的生物樣品作定性、定量分析。它具有微量樣品池進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)，*后達(dá)到分離生物大分子。
二．主要技術(shù)性能
⑴．核酸蛋白檢測(cè)儀波長(zhǎng)范圍：254nm、280nm﹙214nm﹚
⑵．量程靈敏度范圍：0-100℅T、0-2A、0-1A、0-0.5A、0-0.2A、0-0.1A、0-0.05A、0-0.02A、0-0.01A.
⑶．記錄儀輸出：10mV ⑷．積分儀輸出：0.1A/mV
⑸．流式樣品池：容積100微升、光程5毫米
（微量樣品池：容積80微升、光程3毫米）
⑹．?dāng)?shù)顯模式：固定A量程讀數(shù)（0-2.0A）：可變A量程讀數(shù)（0-2.0A、0-1.0A、0-0.5A、0-0.2A、0-0.1A、0-0.05A、0-0.02A、HD-21C-B型）
⑺．量程在0.05A檔時(shí)：噪音≦0.002A ⑻．工作環(huán)境溫度：-5～35℃。
⑼．基線噪音：2×10-4；LED數(shù)字顯示；儀器可連續(xù)工作1個(gè)月
⑽．儀器工作時(shí)不受到任何震動(dòng)，周圍不受磁場(chǎng)干擾。
⑾．電源：220VAC±10%50HZ ⑿．主機(jī)重量：5kg
三、儀器結(jié)構(gòu)
核酸蛋白檢測(cè)儀、紫外檢測(cè)儀是單光路結(jié)構(gòu)，由紫外檢測(cè)器、電源和記錄儀三部分組成，由紫外檢測(cè)器和電源連結(jié)，屬單體結(jié)構(gòu)，現(xiàn)將其構(gòu)造分別說(shuō)明如下：
⑴、 紫外檢測(cè)儀：
它由一組光源，四塊干涉濾色片，一塊聚光透鏡，一只樣品池，一只光電倍增管，一塊放大板和一塊
對(duì)數(shù)板等組成。面板上有聚乙烯塑料管的進(jìn)樣口和出樣口，A調(diào)零以及調(diào)節(jié)“光量”大小旋鈕（光量大下以箭頭表示）。還有光源指示燈、電源指示燈以及量程轉(zhuǎn)換旋鈕。
光源主要提供214nm、220nm、254nm、280nm、340nm分別作為檢測(cè)核酸、蛋白、酶、多肽等的光源。
濾色器由214nm、220nm、254nm、280nm、340nm，四塊干涉濾色片組成。從光源發(fā)出的光束除214nm、220nm、254nm、280nm、340nm譜線外尚含有其他波長(zhǎng)的譜線，通過(guò)各自所對(duì)應(yīng)的濾色片就把非主譜線波長(zhǎng)以外的其他波長(zhǎng)濾去，這就保證了儀器的單色性。
核酸蛋白檢測(cè)儀除測(cè)214nm、254nm、280nm外，其他性能均同紫外檢測(cè)儀。
樣品池由石英玻璃管拉制而成，內(nèi)徑一般為3毫米左右，容積不大于100微升。
光電倍增管采用IP28或R212（進(jìn)口）光電倍增管作為電轉(zhuǎn)換器，具有靈敏度高，穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)。緊靠在光電倍增管后的放大器是一高輸入阻抗噪音的直流放大器，它把光電倍增管輸出的光電流進(jìn)一步放大，然后輸入到對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器。
⑵、 電源
本儀器的電源部分是一個(gè)獨(dú)立系統(tǒng)，單獨(dú)安裝在一機(jī)箱內(nèi)。機(jī)箱內(nèi)有兩塊電路板，一塊是輸出±12V和+27V的低壓穩(wěn)壓電源板，另一塊是帶有高壓負(fù)反饋的高壓穩(wěn)壓電源板，它由一組輸出-700V高壓，作為光電倍增管和光源的供電電源，光源工作電壓為160V左右，電源面板上裝有電源開關(guān)、電源指示燈。在電源后面板上，裝有電源插頭座、保險(xiǎn)絲座、記錄儀信號(hào)插頭座以及穩(wěn)壓電源插座。
從光源發(fā)出的光經(jīng)聚光透鏡，狹縫，濾色器聚焦到樣品池上，此單色光通過(guò)樣品池射到光電倍增管的光陰極面上，使光束由于樣品濃度不同所引起透光強(qiáng)度的變化轉(zhuǎn)換成光電流變化，此光電流經(jīng)放大器放大，并輸入到對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器、使透光率T轉(zhuǎn)換成光吸收A輸出即A=lg—=ε·CL式中ε為待測(cè)樣品的摩爾消光系統(tǒng)，C為樣品濃度，采用摩爾/升單位，L為光程，用厘米作單位。根據(jù)上式只要測(cè)出了A、L和ε就可求出樣品濃度C。若從放大器直接輸入到記錄儀，則在記錄儀上繪出的是樣品透光率T變化的圖譜，若從對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器輸入到記錄儀上、在記錄儀上繪出的是樣品光吸收變化的圖譜。
四、使用說(shuō)明和操作步驟
⑴、在儀器使用前，首先連接好所需配套儀器：層析柱、恒流泵、自動(dòng)部分收集器、記錄儀（色譜工作站）。將各類插頭與插座接妥（220V電源）。
⑵、按下檢測(cè)儀ON電源開關(guān)，電源指示燈亮，說(shuō)明整臺(tái)儀器電源開始工作，然后觀察光源指示燈，如果亮了，表示光源已開始工作，整臺(tái)儀器可進(jìn)入工作狀態(tài)，將檢測(cè)儀波長(zhǎng)旋鈕旋到所需波長(zhǎng)刻度上，把量程旋鈕撥到100%T檔（儀器預(yù)熱20分鐘，待基線平直后可加樣測(cè)試）。
⑶、接通記錄儀電源開關(guān)，使電源開關(guān)撥到“通”指示燈亮。可根據(jù)記錄儀說(shuō)明書調(diào)換不同的紙速度，用戶根據(jù)需要自行掌握，測(cè)量用10mV檔。此時(shí)記錄儀指針從零點(diǎn)開始向右移動(dòng)某一刻度，調(diào)節(jié)檢測(cè)儀“光量”旋鈕使指針停留在記錄儀大約中間位置5mV左右數(shù)字顯示為50左右。。
⑷、把檢測(cè)儀進(jìn)樣口聚乙烯塑料管接到恒流泵上，使凝膠層析柱中緩沖液流過(guò)檢測(cè)儀（恒流泵流量視凝膠層析柱大小選1-3ml/min）。用“調(diào)零”調(diào)整吸光度A值為0（量程開關(guān)撥到100%T調(diào)節(jié)光量旋鈕，使記錄儀指針在10mV數(shù)字顯示為100，即透光率為100%。把量程開關(guān)撥到“0.05A”檔，緩慢調(diào)節(jié)A調(diào)零旋鈕，使記錄儀指示在“O”位，檢測(cè)儀顯示為“O”）。
⑸、以上步驟結(jié)束，層析系統(tǒng)平衡后即可用洗脫液開始洗脫樣品，洗脫前再調(diào)一次吸光度0點(diǎn)。洗脫過(guò)程結(jié)束前不可再調(diào)節(jié)“調(diào)零”旋鈕。當(dāng)洗脫液流過(guò)檢測(cè)儀時(shí)，吸光度顯示大于零的數(shù)值，吸光度數(shù)值大小隨樣品的濃度而變化。洗脫完畢后吸光度顯示為稍大于零的數(shù)值。
⑹、數(shù)字顯示吸光度和記錄儀自動(dòng)繪制吸光度圖譜是兩個(gè)互相獨(dú)立的檢測(cè)系統(tǒng)，數(shù)字顯示吸光度與記錄儀所繪峰值大小沒有直接關(guān)系，不可互相換算。
⑺、測(cè)試完畢后，必須切斷電源，并用蒸餾水清洗樣品池和聚乙烯塑料管。